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關(guān)于如何選擇基因診斷技術(shù)有兩層含義:第一,什么情況下選擇基因診斷;第二,如果選擇了基因診斷,應(yīng)當(dāng)采用哪一種基因診斷技術(shù)。以下分別介紹。
1.選擇基因診斷的依據(jù)。
1)基因診斷可以彌補(bǔ)免疫學(xué)檢測技術(shù)的缺陷 免疫學(xué)診斷主要依賴于抗原抗體反應(yīng),應(yīng)用于臨床只能在體內(nèi)產(chǎn)生抗體以后,也就是病程的中期及晚期,不能應(yīng)用于早期診斷,往往由于地區(qū)的流行及個體的差異出現(xiàn)非特異交叉反應(yīng),雖然目前已制備了針對多種抗原的單克隆抗體,使抗原抗體檢測技術(shù)的特異性及敏感性有所提高,但還是解決不了方法上的一些問題。臨床上有下述幾種情況只能用基因診斷方法而不能依賴于免疫這診斷技術(shù):
①在血清學(xué)結(jié)果模棱兩可不能得出結(jié)論時,或血清學(xué)指標(biāo)與臨床表現(xiàn)不符。
②使用疫苗或特異性抗血清治療或免疫后的病例,用免疫學(xué)指標(biāo)已經(jīng)不能反應(yīng)病原體感染的程度。
③大部分病原體可以整合入細(xì)胞內(nèi)成為為整合型,免疫學(xué)方法只能測其細(xì)胞外表型。
④獻(xiàn)血員的篩選試驗(yàn)僅采用免疫技術(shù)是不夠的,如配合PCR方法可提高篩選試驗(yàn)的可靠性。
⑤某些病原體感染后,特異抗體的產(chǎn)生并不意味著臨床恢復(fù)及感染消失。
但是,與免疫學(xué)技術(shù)相比,基因檢測所顯示的優(yōu)越性也恰恰是它的缺陷,因?yàn)槲覀冎荒芡ㄟ^它來判斷病原體的有無和量的多少,至于病原體進(jìn)入體內(nèi)之后,機(jī)體作出了何種反應(yīng)?反應(yīng)的結(jié)果如何?基因檢測結(jié)果不能對此作出全面的回答。眾所周知,感染后的免疫應(yīng)答,是感染病學(xué)和免疫學(xué)的重要研究內(nèi)容,也是判斷被感染者病情、治療反應(yīng)、預(yù)后,以及流行病學(xué)調(diào)查的重要依據(jù)。客觀地講,基因檢測和免疫學(xué)檢測技術(shù)是具有互補(bǔ)性的。
2)基因診斷是病原學(xué)診斷的組成部分 傳統(tǒng)的病原學(xué)檢測是指病原體的分離培養(yǎng),如細(xì)菌、病毒的分離和培養(yǎng),但分離和培養(yǎng)技術(shù)迄今尚不能被運(yùn)用于所有病原體,如某些病毒至今無法作形態(tài)觀察;某些細(xì)菌在體外培養(yǎng)的條件非??量蹋蛏L時間太長(如結(jié)核分枝桿菌)等,均難以把分離培養(yǎng)作為檢測這類病原體的常規(guī)手段;另外,不同的病期病原體的含量不同,因此培養(yǎng)后的陽性率不同;再有,用藥會直接影響到細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率。上述種種都是病原體分離培養(yǎng)存在的缺陷。基因檢測技術(shù)基本上可以彌補(bǔ)上述不足,成為病原體分離培養(yǎng)的補(bǔ)充。基因診斷方法還是細(xì)菌病毒等鑒定的簡便、特異和快捷的手段。近年來,基因診斷技術(shù)在病毒的基因分型方面更是發(fā)揮了巨大的作用。但是,基因診斷不可能完全取代病原體直接分離、培養(yǎng)、鑒定技術(shù)。對某些病原體而言,基因診斷的特異性問題尚未完全解決;細(xì)菌對藥物的敏感度測試問題目前還不能完全用基因診斷法來解決;某種病原體的毒性,如病毒的細(xì)菌毒性測定也不能用基因診斷法完成;病原體的形態(tài)學(xué)研究更是不能為基因診斷取代。
3)基因診斷是一種微量和快速診斷技術(shù) 在標(biāo)本量很少,或需要快速獲取結(jié)果時,PCR法很有優(yōu)勢。PCR法所需標(biāo)本量很少,少至1μl也能取得陽性結(jié)果。
4)基因診斷對原始標(biāo)本的要求不高 這一點(diǎn)是其他現(xiàn)有技術(shù)無法比擬的。DNA不象蛋白質(zhì)(抗原或抗體)那樣容易失活,因此,無論是液性的還是干燥了的標(biāo)本;也無論是污染的還是非污染的標(biāo)本,都可用于基因檢測。更具優(yōu)勢的是,任何標(biāo)本都可以通過純化或抽提以供基因檢測,這就避免了標(biāo)本中可能存在的污染物和毒性物質(zhì)對檢測過程的干擾。
2.采用何種基因診斷技術(shù)
我們可以根據(jù)對敏感度的要求、實(shí)驗(yàn)室的條件、實(shí)驗(yàn)人員的技能、標(biāo)本的質(zhì)量、標(biāo)本性質(zhì)、標(biāo)本中待測基因的含量、臨床需要等來選擇檢測方法。對敏感度要求不高時可用雜交法;實(shí)驗(yàn)室條件較好可開展PCP診斷技術(shù);標(biāo)本最較少、污染嚴(yán)重或含雜質(zhì)較多以PCR法為宜;標(biāo)本中待測基因含量很低也以PCR法為佳;檢測組織細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)或定位應(yīng)采用原位雜交;觀察藥物抗病原體的療效,應(yīng)采用基因定量分析技術(shù)?;蛟\斷技術(shù)發(fā)展很快,在方法上可供臨床醫(yī)生選用的余地很大,但與其他任何一種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)一樣,它仍然受制于某些條件,選擇時應(yīng)加以考慮。
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免疫沉淀是研究蛋白質(zhì)常用的技術(shù),是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。[詳細(xì)]
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