實驗室檢測是作為是否感染艾滋病的最重要的依據(jù),所以艾滋病的檢測,在疾病的判斷治療中,顯得尤為重要,而艾滋病的檢測方法,分為很多種,下面就各種艾滋病篩查的檢測方法適用范圍及特點,和大家一起探討一下。
一、檢測的樣本
HIV感染的常用檢測標志物為:抗體HIV-1/2,抗原P24以及HIV的RNA。艾滋病檢測最常用的樣品有血液,包括血清、血漿和全血以及濾紙干血斑,唾液或尿液有時也可作為測試樣品。
不同的標志物,在體內(nèi)產(chǎn)生的時間不同,所以要選用合適的標志物,以便準確確定感染的情況。
二、檢測方法
艾滋病的檢測分為篩查試驗和補充試驗。
篩查試驗包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(CIA/IFA),快速檢測(RT)及其它試驗,
補充試驗包括確診試驗及核酸試驗,在2015年《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》中,將核酸試驗也納入到后期的補充試驗中,以對篩查陽性的樣品進行進一步的檢測,其中確證試驗主要包括免疫印跡試驗(WB),條帶/線性免疫試驗(RIBA/LIA)。核酸試驗包括核酸定性和核酸定量試驗。
1、酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)
ELISA有幾種類型,主要為雙抗原夾心法測抗體,雙抗體夾心法測抗原,間接法測抗體,競爭法、捕獲包被法。
試驗可使用血液(包含血清、血漿和濾紙干血斑)、尿液樣品,多為HIV抗體檢測試劑,HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑可同時檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體,HIV抗原/抗體包被于固相載體,加入待檢樣品和酶標記的HIV抗原/抗體,加底物顯色,用酶標儀測定結(jié)果。
2、化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(CIA/IFA)
試驗采用發(fā)光或熒光底物,可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品,既可
檢測抗體,也可聯(lián)合檢測抗原抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體,加入待檢樣品和酶或熒光標記的HIV抗原/抗體,加發(fā)光或熒光底物,用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果。
3、快速檢測(RT)
快速檢測作為一種方便的方法,現(xiàn)在越來越多的應(yīng)用于實際工作及個人的自測中,這種試驗操作簡便快速,適用于應(yīng)急檢測、門診、急診檢測、VCT及檢測點等,有著不可替代的優(yōu)勢。常用的類型為明膠顆粒凝集試驗(PA),免疫滲濾試驗(膠體金或膠體硒),免疫層析試驗,。
明膠顆粒凝集試驗(PA):將重組HIV-1抗原(HIV-1/gp41和HIV-1/P24)和HIV-2抗原(HIV-2/gp36)包被在人工載體明膠粒子上,這些致敏粒子和血中的HIV-1抗體或HIV-2抗體發(fā)生凝集反應(yīng),由此可以檢測出血清和血漿中的HIV-1/2的抗體。
免疫滲濾試驗:斑點免疫膠體金(或膠體硒)快速試驗:均以硝酸纖維膜為載體,HIV抗原點狀或線狀固定在膜上,加待檢樣品,利用微孔濾膜的可濾過性,使抗原抗體反應(yīng)。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點或條帶,有效試驗的質(zhì)控點必須顯色,反應(yīng)時間在10分鐘以內(nèi)。
免疫層析試驗:以硝酸纖維膜為載體,HIV抗原線狀固定在膜上,待檢樣品沿著固相載體遷移,陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶,有效試驗的質(zhì)控帶必須顯色,反應(yīng)時間在30分鐘以內(nèi)。
三、檢測試劑
在試驗中,經(jīng)常說到的是檢測試劑為三代或四代之類的,這個艾滋病檢測的試劑已經(jīng)從第一代發(fā)展到第四代,目前基本上大都是使用三、四代的試劑,下面以ELISA試劑為例做個具體的說明。
第一代HIV診斷試劑原理為間接ELISA法,所用的包被抗原為體外培養(yǎng)的HIV裂解物,含有很多雜抗原,主要的HIV結(jié)構(gòu)和表達的蛋白濃度不能保證,靈敏度和特異性都不高,會出現(xiàn)很多的假陰性和假陽性。
第二代使用的是基因重組和合成多肽抗原,利用間接ELISA原理,窗口期比第一代縮短20天,靈敏度和特異性有所提高,可以同時檢測HIV-1/2抗體。
第三代利用雙抗原夾心法檢測標本中的抗體,酶標記物改為特異性HIV抗原,檢測HIV-1/2抗體。
第四代試劑是一種HIV-1/2抗體及P24抗原的聯(lián)合檢測方法。
ELISA試劑 |
檢測物 |
抗原來源 |
檢測原理 |
窗口期(天) |
第一代 |
IgG抗體 |
病毒裂解產(chǎn)物 |
間接法 |
35~45 |
第二代 |
IgG抗體 |
基因重組抗原 合成肽 |
間接法 |
25~35 |
第三代 |
igM/igG抗體 |
基因重組抗原 合成肽 |
雙抗原夾心法 |
20~30 |
第四代 |
P24抗原,igM/igG抗體 |
基因重組抗原 合成肽 P24抗原的單克隆抗體 |
雙抗原夾心法 雙抗體夾心法 |
15~20 |
四、篩查報告及流程
HIV抗體篩查試驗報告使用格式化的HIV抗體篩查檢測報告。篩查試驗無反應(yīng)報告為“HIV抗體陰性”;有反應(yīng)必須進行復(fù)檢,復(fù)檢兩次檢測均無反應(yīng)報告為“HIV抗體陰性”,復(fù)檢檢測均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)需進行“補充試驗”;報告為“HIV感染待確定”,不能出具陽性報告。
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